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HEPATITIS B (CARGA VIRAL)
Ver: Introducción a Biología Molecular
Sinonimia: determinación de HBV- DNA.
Método:
Reacción en cadena de la Polimerasa (PCR)
Branched DNA (b DNA): el objetivo de este ensayo son regiones conservadas
del genoma del HBV con sondas destinadas a detectar todos los genotipos
conocidos del virus. Es una tecnología de amplificación
de señal para la cuantificación directa de ácidos
nucleicos virales tal cual circulan fisiológicamente en suero de
pacientes infectados ya que no hay amplificación del material genético.
Los ensayos de b-DNA utilizan estándares que son calibrados contra
un gold estándar que es validado por tres métodos analíticos
independientes (espectrofotometría, análisis de fosfato,
hipercromicidad)
Especificidad :mayor del 98%.
Sensibilidad:0.7 HBV M eq/ml (2.5 pg/ml)
Rango dinámico: 0.7-5000 HBV Meq/ml (2.5-17.700 pg/ml)
Muestra: VER APENDICE DE TOMA DE MUESTRA DE BIOLOGIA MOLECULAR.
Valor de referencia: Depende el método utilizado.
Ver: GRAFICOS DE HEPATITIS B
Significado clínico:
Durante la etapa aguda de la infección por el virus de la hepatitis
B y el período inicial de una infección crónica,
el DNA está en forma episomal (libre o extracromosomal) y replica
en el hepatocito con transcripción completa del genoma, produciendo
por lo tanto viriones infectivos, DNA polimerasa, HbsAg, Hbcore antígeno
y HbeAg. Esta fase es de alta infectividad y de enfermedad hepática
activa en las formas crónicas.
Por diversos factores, del huésped y vírales, esta etapa
puede evolucionar a la fase no replicativa de infección donde el
DNA del virus se integra al genoma del hepatocito (cromosoma). Si bien
es más frecuente que ocurra en una etapa crónica, también
se han descripto casos de integrantes en etapa aguda y aún en hepatitis
fulminantes.
El genoma integrado puede ser defectivo, y por lo tanto la transcripción
es incompleta, generalmente se expresa el gen S con poca o ninguna expresión
de las demás proteínas virales. Esta fase está asociada
con la aparición del anticuerpo anti-HBe en suero, baja infectividad
y remisión de enfermedad activa en el hígado que puede mostrar
una hepatitis crónica persistente o cirrosis inactiva.
Siempre con HbsAg (+) esta separación en fases nunca es absoluta
o definitiva, ya que pueden encontrarse pacientes con anti-HBe en suero
y tener todavía HBV-DNA en circulación (viriones) y/o Hbcore
antígeno intrahepático con una hepatitis crónica
activa.
Esto explicaría la reactivación observada en algunas hepatitis
crónicas en fase no replicativa.
Por lo tanto, los factores determinantes en la patogénesis de la
injuria hepática por HBV la replicación viral y la respuesta
inmune celular.
En la infección latente una cierta proporción de las células
mononucleares de la sangre periférica de portadores crónicos
del virus, poseen formas monoméricas o multiméricas del
ADN del HBV está presente en linfocitos B, monocitos, células
linfoblásticas de la médula ósea así como
en leucocitos polimorfonucleares.
La eficacia de la terapia antiviral usada en el tratamiento de pacientes
con HBV se hace con marcadores serológicos o con medición
de enzimas de la función hepática. La forma más directa
y confiable de medir la replicación viral es a través de
la detección cuantitativa de la carga viral (DNA) en plasma.
Un rápido y sostenido descenso en los niveles de HBV DNA en pacientes
recibiendo terapia con Alfa interferón, muestra ser un factor predictivo
de un tratamiento favorable.
Aunque debe ser usado en combinación con otros tests, es un marcador
temprano de recurrencia.
| INDICACIONES PARA LA TERAPIA CON INTERFERON
HEPATITIS CRÓNICA B ASÍ COMO EL MONITOREO DE LA TERAPIA.
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INDICACIONES
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FALTA DE CONTRAINDICACIONES (CIRROSIS HEPATICA
DESCOMPENSADA,ENFERMEDAD AUTOINMUNE, DEPRESION, ENFERMEDAD EXTRAHEPATICA
SEVERA, EMBARAZO) |
HOSTOLOGIA HEPATICA
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RECOMENDADA |
PROTOCOLO
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INTERFERON ALFA
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4-6 MILLONES IU,3 VECES POR SEMANA |
DURACION
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4-6 MESES |
MONITOREO
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EXAMEN CLINICO:CADA 2 SEMANAS POR LAS PRIMERAS
6-8
TRANSAMINASAS :CADA 2 SEMANAS POR LAS PRIMERAS 6-8 SEMANAS.
HBV-DNA (HIBRIDACION) Y HBeAg Y ANTI-HBe CADA 3 MESES |
META TERAPEUTICA
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NORMALIZACION DE TRANSAMINASAS, SEROCONVERSION
DEL HBeAg a ANTIHBe (EN PACIENTES HBeAg POSITIVOS),ELIMINACION DEL
HBV DNA,ELIMINACION DEL HBsAg |
La determinación de carga viral se usa para medir niveles de HBV
DNA en pacientes infectados crónicamente los cuales fueron tratados
con bajas dosis de interferón (5 . 105 unidades en días
alternados incrementando a 3.106 por 24 semanas.
Los niveles de ALT y Hbeag antes de iniciada el tratamiento no reflejan
los niveles de HBV-DNA. Ni la ALT ni Hbeag refleja los niveles extremadamente
aumentados de HBV-DNA .
En individuos Hbeag negativo que son HBV-DNA positivo y contienen una
mutación en el gen pre -core es muy importante el uso de la carga
viral para el monitoreo de la terapia, ya que estos pacientes con dicha
mutación luego del tratamiento pueden tener una recuperación
clínica pero el HBV puede permanecer muy bajo ( PCR positivo )
por periodos que exceden 5 años.
Utilidad clínica:
- Evaluación de transplantes hepáticos: la medición
de los niveles de DNA-HBV sugiere el riesgo de reinfeccion en los transplantes
hepáticos.
- Factor pronóstico de progreso de la enfermedad y del desenlace
del tratamiento .
- Monitoreo del tratamiento con antivirales (interferón) y las
tendencias de la enfermedad. Los cambios se consideran significativo
solo si ellos son mayores que aquellos cambios debido a la variabilidad
biológica o los debidos a la variabilidad del ensayo
Un cambio en los niveles de HBV-DNA mayores de 2 logaritmos detectados
por la técnica de b-DNA se consideran significativo.
Falsos negativos: muestras recolectadas con heparina que inhiben
la polimerasa. Mutaciones de ácidos nucleicos que afectan la región
donde se unirá el “primer” causa un falso negativo
Bibliografía:
1. LotharT. Clinical Laboratory Diagnostics: Use and assessment of clinical
laboratory results, English edition, 1998.
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